附录 干扰素效价测定

采用CPE（细胞致病效应）抑制为基础的抑制微量测定法，以每ml干扰素检品的最高稀释度仍能保护半数细胞（50）免受病毒攻击的稀释度的倒数定为干扰素单位。以国际单位（IU）表示，并用国家标准品校正结果。

1　细胞培养

将新鲜传代24～48小时的Wish细胞（人羊膜细胞）以约35万/ml的浓度另入96孔组织培养板上，每孔100μl，置37℃5%CO₂孵箱中培养4～6小时。

2　样品稀释与细胞混合

干扰素检品做4倍系列稀释，每份检品做6个稀释度（如100万单位，则测4^-12～4^-7）每个稀释度加2孔，与培养板中的细胞等量混合，置37℃5%CO₂5%CO₂孵箱培养18～24小时。

3　加病毒

倒掉培养板中的上清液，以100CCID₅₀/ml的浓度加入VSV（水泡性口腔炎病毒），每孔100μl，37℃5%CO₂孵箱培养24小时左右。

4　观察结果

显微镜下观察细胞病变，若病毒对照各孔细胞出现75%～1000%的明显病变和死亡（变圆、死亡、脱落（，而细胞对照组中的细胞仍生长良好（病变=0），则表明对照系统合格，结果成立。

5　计算

通常可按Reed?/FONT>Muench法计算，其步骤如下：

（1）计算保护百分比

（2）求出干扰素单位

距离比=（·高于50%的百分数－50）/（高于50%的百分数－低分50%百分数）=（83－50）/（83－40）=33/43=0.77

即此批干扰素稀释到4-3。77（1∶186）时能保护半数细胞免受攻击病毒损害。此批干扰素效价为186单位，经国家标准品修正，得出干扰素的国际单位（以IU表示）。