检测幽门螺杆菌感染几种方法的比较

自1983年Warrn和Marshall从胃粘膜成功分离出幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,Hp)后,与胃炎及溃疡病的关系引人关注,并指出Hp可能是其病因之一。检测Hp感染方法较多。本文对95例胃粘膜组织行细菌培养、尿素酶试验、直接涂片、HE染色、Giemsa染色、改良Warthin-Starry银染检测Hp的方法比较。力求寻找出简便、经济、敏感性、特异性高的方法,实用于临床诊断Hp感染。

1 对象和方法

1.1 对象

连续收集1990—03~1990—06因上消化道症状行内镜检查(Olympus GIF XQ10)。胃镜诊断慢性胃炎及消化溃疡患者95例。取距幽门5cm内的胃窦粘膜5块,分别供以上各种检测用。男74例,女21例;17岁~62岁,平均年龄42.8岁;其中慢性胃炎30例、胃溃疡8例,球部溃疡37例,复合溃疡20例。

1.2 方法

①细菌培养:将活检标本接种于肉浸液加8%~10%羊血及抗菌混合液的琼脂平板中,于防良厌氧缺罐(5%O2,7%CO2、80%N2、8%H2、湿度98%)内,37℃、培养3d~7d,见1mm~2mm大小的露滴样、光滑、灰白色菌落,菌落涂片镜检生化鉴定(尿素酶、氧化酶、触酶等)。7d不见菌落为阴性。②尿素酶试验:采用改良Christensen细菌尿素酶鉴定试剂。取0.1ml试剂于平皿圆孔中,将胃粘膜置于此孔中,试剂由淡黄变淡红色为阳性,不变色为阴性,其中1h内变色为阳性,2h~5h变色为延迟性。③直接涂片:粘膜涂于洁净玻片上,范围为1.5cm×2.5cm大小,酒精灯固定,革兰染色,10×100倍油镜观察。Hp为革兰阴性呈∽、C弯曲状或螺旋状,形态典型。④HE染色:常规HE染色,镜检。40×10倍光镜下生病理诊断,100×10锐油镜下观察Hp。Hp位于胃粘膜上皮表面,胃小凹及胃腺腔中,呈淡红变弯曲状物,较难分辨。⑤改良W-S银染:将脱蜡切片于43℃的1%AgNO3液中浸润15min,准备显色剂。将浸染的切片于盛有显色剂立式染缸中加盖、加热维持恒温70℃约8min~10min,切片呈浅棕色。取出切片,热水彻底冲洗,脱水,透明,中性树脂封片。100×10倍镜下观察Hp,其在淡黄色背景上呈棕色或褐色弯曲状物,易辨认。⑥Giemsa染色:将脱蜡切片于Giemsa稀释液中浸染20min,待组织呈蓝色,蒸馏水漂洗,PBS液分色约3min~5min,透明,中性脂封片。100×10倍镜下观察。Hp呈深蓝色弯曲状物,较易分辨。⑦菌量分级:菌Marshall分级法0级;无菌;Ⅰ级:认真寻找可见;Ⅱ级:多数高倍视野可见;Ⅲ级:高倍视野很多或成堆成串。

所有资料按四格表行X2检验,若例数小于40或理论值小于1,则采用确切概率法计算。

2 结果

表1 检测Hp各种方法的检出率

检测方法n阳性阴性假阳性假阴性敏感性(%)特异性(%)检出率(%)
细菌培养9560350888.2100.063.2
尿素酶试验9566291395.696.469.5
直接涂片95583711085.096.461.1a
HE染色95563901269.0100.058.9a
Giemsa染色9568272297.192.571.5
改良W-S9571244198.586.774.7

aP<0.05

表2 胃粘膜组织切片三种染色菌量分级

染色方法n+++++阳性率(%)
HE9527227b3958.9
Giemsa951624282771.6
改良W-S951430272474.7

bP<0.01

在各种方法中,改良W-S染检出率最高,HE染最低,经X2检验,差异有显著性(P<0.05);尿素酶试验、Giemsa染与改良W-S染比较,差异无显著性(P>0.05);且其特异性、敏感性均在92%以上。表2之菌量分级,HE染与改良W-S染比较,差异有显著性(P<0.05);Giemsa染与改良W-S染比较,差异无显著性(P>0.05)。

3 讨论

本文对几种常用检测Hp感染的方法进行比较,其敏感性、特异性、检出率及方法难易、速度、费用上均有不同。检出率以改良W-S染最高,HE染最低;特异性以培养法最高。细菌培养是鉴定Hp阳性最可靠的方法,特异性100%,但培养需要一定条件和技术,影响因素多,敏感性较低,时间长,一般单位难以开展。HE染色作病理诊断的同时兼作Hp检测。但其敏感性差,菌量分级少,Hp难以分辨。改良W-S银染是一种检出率最高的经典方法,但其操作方法复杂,显色剂难配制。每次染色需加热、恒温及配显色剂,热水冲洗不彻底,杂质影响观察,银试剂贵耗时耗资。Giemsa染与改良W-S染在检出率及菌量分级方面比较,差异均无显著性(P>0.05)。特异性高,方法简单、便宜,是较理想的组织切片诊断Hp方法,这与国外学者报道一致。直接涂片Hp呈革兰阴性菌,形态典型,有简单,快速(1h~2h内)之特点,但敏感性低。尿素酶试验具有快速(几min至5h内)、简便、经济、敏感性及特异性高的优点,与直接涂片法联用可提高敏感性及特异性。

尿素酶试验联合直接涂片法是检测Hp感快速、简单、经济、特异性、敏感性高的方法,有利于各级医院临床推广使用;Giemsa染是较理想组织切片诊断Hp感染的方法;培养及改良W-S银染可在有条件单位开展。

《中国幽门螺杆菌研究》